黃曲霉毒素M1 （Aflatoxins M1）ELISA檢測試劑盒

產品名稱：黃曲霉M1試劑盒

產品概述：黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產物，它們具有很強的致癌性，主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液，動物飼料相關的產品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物，也是一種強致癌物質。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。

適用范圍

黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒可定性、定量檢測牛奶，奶粉等樣本中的黃曲霉毒素M1

檢測限：0.1ppb

試驗原理

黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒采用競爭ELISA，在微孔板上預包被黃曲霉毒素M1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。與樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

試劑配制

1. 樣品稀釋液：用去離子水將濃縮樣品稀釋液按1:9體積比進行稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水）。

2. 洗滌工作液：用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積比進行稀釋。

操作步驟

1. 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出需要數量的微孔板，將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。

3. 洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5. 加標準品/樣本50ml到對應的微孔中，加入酶標物50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應30min。

6. 小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干。

7. 加入顯色液100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應30min。

8. 加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處測定每孔OD值。

注意事項

1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3. 每加一種試劑前需將其搖勻。

4. 反應終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6. 儲存條件：

保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7. 試劑變質的跡象：

發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8. 在加入底物液液后，一般顯色時間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應時間。

9. 該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

試劑盒組成

1. 96孔酶標板×1塊 

2. 標準液×6瓶：（1ml/瓶） 

   0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

3. 酶標物 1瓶  ……………………………………… 6ml

4. 顯色液1瓶    ……………………………………  12ml

5. 終止液一瓶    ………………………………………6ml

6. 濃縮洗滌液 （10×） ……………………………… 40ml

7. 濃縮樣品稀釋液（10×）  ………………………… 20ml

貯藏條件及保存期

        貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

        保存期：該產品有效期為12個月。

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