C18液相色譜柱的使用及維護(hù)方法

在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類(lèi)型結(jié)構(gòu)、性、酸堿性、分子量大小等等，

1.樣品是性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100%純水且對(duì)性化合物保留很好的色譜柱

2. 如果樣品性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就用于其它實(shí)驗(yàn)）

3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留。

4.如果堿性化合物的性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。

C18柱是一種常用的反相色譜柱，它以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，因此有較高的碳含量和更好的疏水性，對(duì)各種類(lèi)型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，適用范圍較廣，是液相色譜儀分析中的色譜柱類(lèi)型。

在使用液相色譜C18儀柱過(guò)程中，須注意以下事項(xiàng)：

1、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速?zèng)_洗，作用是使固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲箯氐?，使色譜柱的性能狀態(tài)。具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測(cè)器，以免污染了檢測(cè)器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過(guò)20分鐘后再接上檢測(cè)器，以1.0ml/min的流速，繼續(xù)沖洗2~8小時(shí)；

2、液相色譜儀檢測(cè)分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱。尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí)，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積； 

3、若色譜柱處于長(zhǎng)期閑置狀態(tài)時(shí)，要將色譜柱徹底沖洗，建議沖洗3-4小時(shí)以上，后保存在純?cè)噭┗蚋弑壤脑噭┤芤海ㄈ?/span>90%甲醇水）中； 

4、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，在使用過(guò)程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過(guò)高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效下降，甚至造成不可逆的負(fù)面影響；由于碳載量高，表現(xiàn)尤為明顯，建議使用過(guò)程中水相比例不過(guò)90%；

5、色譜柱壓力升高、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效；  

6、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速?zèng)_ 洗至壓力恢復(fù)即可；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動(dòng)相反沖色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測(cè)器），若反沖半小時(shí)仍無(wú)效果則說(shuō)明反沖無(wú)效，需尋找其他原因。