肝素免疫親和柱說明書

　　1、用途：

　　肝素免疫親和柱可特異吸附乳鐵蛋白，試樣中鐵蛋白經(jīng)緩沖液提取，用肝素親和柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。

　　肝素免疫親和柱與HPLC配合使用可達(dá)到快速測定的目的，以改善信噪比，可提高檢測方法的準(zhǔn)確度。

　　2、概述：

　　乳鐵蛋白（Lactoferrin,Lf）是一種主要存在于哺乳動物乳汁中的糖蛋白，相對分子量約為80KDa，乳鐵蛋白在體內(nèi)不僅參與鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)，還具有抗菌、抗病毒、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)的功能。被認(rèn)為是一種新型的抗菌、抗癌藥物和具有開發(fā)潛力的食品和飼料添加劑。目前已被廣泛添加于嬰幼兒食品中。

　　3、原理：

　　肝素免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，樣品前處理后，通過免疫親和柱凈化，乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上，用淋洗液將免疫親合柱上的雜質(zhì)除去，用洗脫液通過分離柱，將乳鐵蛋白親和柱上分離下來，最后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測定。

　　4、包裝組成：

　　每一個盒中包括各種規(guī)格的肝素親和柱及1份說明書。

　　5、注意事項(xiàng)：

　　----使用前，親和柱需回至室溫（18～25℃）。

　　----親和柱2～8℃儲存，不得凍存；冰箱內(nèi)建議不要貼壁放置，產(chǎn)品易凍，影響性能！

　　----請?jiān)谟行掌趦?nèi)使用親和柱。

　　----取樣量：根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量，注意提取液量要相應(yīng)改變。

　　----柱容量：5mg，當(dāng)樣本中待檢乳鐵蛋白的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時，需要適當(dāng)降低上樣液的體積，

　　----樣品的凈化過程中勿將親和柱內(nèi)的液體抽干，避免氣體進(jìn)入到親和柱的填料中。

　　----三氟乙酸揮發(fā)性、腐蝕性較強(qiáng)，使用過程中注意防護(hù)。

　　6、配制溶液：

　　6.1磷酸鹽緩沖液Ⅰ（洗脫液）:稱取7.1g磷酸氫二鈉、58.4g氯化鈉,加900mL水溶解,用磷酸調(diào)pH至8.0±0.2,加水定容至1000mL。

　　6.2磷酸鹽緩沖液Ⅱ（提取液）:稱取30.1g十二水合磷酸氫二鈉，2.5g二水合磷酸二氫鈉,加900mL水溶解,然后加入20ml乳鐵蛋白提取試劑,加水定容至1000mL

　　6.3磷酸鹽緩沖液Ⅲ（淋洗液）::稱取30.1g十二水合磷酸氫二鈉，2.5g二水合磷酸二氫鈉,加900mL水溶解并定容至1000mL。

　　6.4磷酸鹽緩沖液Ⅳ（國標(biāo)提取液）：

　　稱取71.6g十二水合磷酸氫二鈉（或28.4g磷酸氫二鈉），

　　加入900mL去離子水溶解并用磷酸調(diào)pH至7.5±0.2，最后用水定容至1000mL。

　　7、樣品處理：

　　固態(tài)試樣(調(diào)制乳粉、乳基嬰幼兒配方食品

　　方法一（同國標(biāo)方法）：

　　----稱取2.5g(準(zhǔn)確至0.01g)試樣于燒杯中,加入溫?zé)?溫度不超過50℃)的磷酸鹽緩沖液Ⅳ,攪拌使樣品溶解,冷卻至室溫。

　　----分次將樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶并用磷酸鹽緩沖液Ⅳ定容至刻度,充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管中，取40.0mL溶液在4℃條件下10000r/min離心8min,取10ml上清液作為上樣液待凈化。

　　稀釋倍數(shù)：2

　　方法二：

　　----稱取2.5g(準(zhǔn)確至0.01g)試樣于燒杯中,加入溫?zé)?溫度不超過50℃)的磷酸鹽緩沖液Ⅱ,攪拌使樣品溶解,冷卻至室溫。

　　----分次將樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶并用磷酸鹽緩沖液Ⅱ定容至刻度,充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管中，取40.0mL溶液在4℃條件下10000r/min離心8min,取10ml上清液作為上樣液待凈化。

　　稀釋倍數(shù)：2

　　液態(tài)試樣(巴氏殺菌乳、調(diào)制乳、含乳飲料)

　　方法一（同國標(biāo)方法）：

　　----稱取5g(準(zhǔn)確至0.01g)試樣于燒杯中,加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅳ提取,分次將樣品轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶,用磷酸鹽緩沖液Ⅳ定容至刻度。

　　----充分混勻后轉(zhuǎn)入離心管,在4℃條件下10000r/min離心8min,取10ml上清液作為上樣液待凈化，