德國皇家微生物快速檢測系統(tǒng)
德國皇家微生物快速檢測系統(tǒng)RVLM
德國RBG公司榮譽出品,
RVLM微生物快速檢測系統(tǒng)的分析法已通過ISO 16140:2003 食品和動物飼料的微生物學(xué)-代替法的驗證協(xié)議
品質(zhì)的微生物檢測系統(tǒng)RVLM 可完全取代傳統(tǒng)微生物實驗室的高科技結(jié)晶.
德國皇家微生物快速檢測系統(tǒng)RVLM
主要特點：
檢測原理:集傳統(tǒng)檢驗方法優(yōu)點于一身:-培養(yǎng)皿法-酶法（β-葡萄糖苷酸酶分析）-免疫法（抗原搜尋）-基因法（基因搜尋）
檢測范圍：
活菌總數(shù);
大腸菌群;
大腸桿菌;
腸道桿菌科;
金黃色葡萄球菌;
綠膿桿菌;
沙門氏菌;
李斯特菌;
腸球菌;
亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌;
產(chǎn)氣莢膜梭菌;
霉菌(曲霉屬真菌、曲霉菌);
酵母菌。 以后還有陸續(xù)有其他微生物菌種的檢測瓶相繼面世。包括軍團菌等應(yīng)用范圍：衛(wèi)生控制：-食品（HACCP）-廚房、工具、表面（HACCP）-水質(zhì)-(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫-藥品及化妝品與我們的生活息息相關(guān)，例如：咖啡館、餐廳水 分析實驗室和HACCP診斷農(nóng)產(chǎn)品及相關(guān)加工公司藥廠、藥房、化妝品廠環(huán)境監(jiān)測機構(gòu)水配送公司消費者保護團體、工商管理機構(gòu)室內(nèi)空調(diào)調(diào)節(jié)公司源檢測、制水廠
檢驗樣本無需任何前處理-液態(tài)樣本，固態(tài)樣本和表面樣本均無需前處理定性和定量分析-搭配檢測機：100%的定量分析-肉眼判讀：定性或半定量分析簡單便捷-簡單的三個步驟得到檢測結(jié)果檢驗迅速-是傳統(tǒng)檢驗方法速度的2～5倍高靈敏性-可以檢測到1目標(biāo)微生物（理論極值）高特異性-特異性高達99.999%（理論極值）檢測瓶就是實驗室-微生物檢測瓶隨時可用-未受過嚴格訓(xùn)練的檢測人員也可隨時隨地進行檢測使用后安全丟棄-和過期藥物同樣處理
微生物快速診斷 RVL@產(chǎn)品 Q&A 1. 微生物檢測瓶除可以檢測活菌外，死菌可以檢測么？ 答：不能檢測死菌。 2. 微生物檢測瓶可以檢測厭氧菌么？ 答：檢測瓶的檢測范圍即包括厭氧菌（亞硫酸鹽梭狀芽胞桿菌 Sulphite reducing Clostridia，產(chǎn)氣莢膜桿菌 Clostridium perfrigens），也包括需氧菌。 檢測不同種微類生物的檢測瓶中試劑不同。對于厭氧菌，我們有特殊的試劑，如檢測產(chǎn)氣莢膜桿菌 Clostridium perfrigens。 3. 檢測瓶的檢測原理都分別用到了哪些檢測方法？ 答：培養(yǎng)皿法、酶法、免疫法、基因法。 4. 對于第 3 題，你能簡要敘述這些方法的優(yōu)劣勢么？ 答：與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基法、膠體金、酶免法和 PCR 法不同，德國皇家微生物檢測儀是多種方法的集合。單獨使用一種檢測方法都有自己的缺點：比如， PCR 法需要技術(shù)人員和昂貴設(shè)備； 培養(yǎng)基法操作復(fù)雜； 膠體金法靈敏度低； 酶免法特異性捕捉不充分。 德國皇家微生物檢測瓶快速檢測系列產(chǎn)品是以上多種方法的綜合運用，吸收了每種方法的優(yōu)點，彌補了各種方法的不足。5. 用微生物檢測瓶進行微生物檢測時，步是先放樣本還是無菌水？ 答：都可以。 6. 對樣本進行微生物接種時，需要在無菌環(huán)境下進行么？ 答：檢測瓶是通過捕捉特異性，結(jié)合多種檢測法進行分析。無菌環(huán)境與否均可（臨檢的場所大都是非無菌環(huán)境）。 7. 檢測瓶可以檢測表面樣本和固態(tài)樣本么？ 答：可以檢測固態(tài)、液態(tài)、表面樣本（用所配棉棒沾濕無菌水后涂抹表面）。紙漿等膏狀、糊狀、粘稠狀昂本都可以檢測。 8. 檢測瓶在檢測固態(tài)樣本時需要對進行研磨、稀釋等前處理過程么？ 答：直接將樣本放入檢測瓶，無需任何前處理。 9. 每次檢測的無菌水用量是多少？ 答：一般是 11ml。如果是檢測液態(tài)樣本或水樣本，建議加樣 1ml，加無菌水 10ml。 10. 放入樣本和無菌水后，“搖勻使其充分溶解和混合”這一操作步驟，無論定性分析還是定量分析，都是必要的步驟么？ 答：是的，搖勻無論是定性還是定量分析都是必要步驟。 11. 不同的微生物對應(yīng)的孵育溫度是一樣的么?請舉例說明。 答：不一樣。37 攝氏度居多：活菌總數(shù)、沙門氏菌、李斯特菌等，大腸桿菌 44 攝氏度等，詳細請參考對照表。 12. 若是檢測冷菜或者冰欺凌這樣的樣本，孵育是否應(yīng)該低溫進行？ 答：對檢測樣本自身的溫度沒有限制，檢測樣本中微生物，請嚴格遵照所檢測微生物對應(yīng)的孵育溫度，依然根據(jù)對照表。 13. 如果想加快檢測時間，孵育溫度可以調(diào)至高于所檢測微生物對應(yīng)的孵育溫度？ 答：不可以，嚴格遵照對照表。 14. 操作手冊規(guī)定放入的樣本量為多少？ 答：0.1g‐1.0g 或 0.1ml‐1.0ml。 15. 若放入的樣本量高于規(guī)定的樣本量，檢測結(jié)果會不同，或者檢測結(jié)果（定量時）增加么？ 答：樣本量多一些或少一些，定量分析結(jié)果不會有變化。 原因：傳統(tǒng)的微生物學(xué)檢測方法，包括參考方法，即基于固體選擇性培養(yǎng)基的菌落計數(shù)法內(nèi)在的統(tǒng)計分散度（統(tǒng)計名詞，也稱為統(tǒng)計變異，是變量或概率分布蔓延，常見的例子是方差，標(biāo)準(zhǔn)差和四分位距。）大于 50%。很多實驗室已經(jīng)證實皇家生物檢測法與其他檢測方法比統(tǒng)計分散度低，可信度高。但不管怎樣，25‐30%的統(tǒng)計分散度還是有的。另外，由采樣產(chǎn)生的統(tǒng)計分散度同樣應(yīng)該考慮在內(nèi)，尤其是微生物經(jīng)常容易繁殖的固態(tài)的肉制品類。 因此，加樣是 0.5g 或 1.5g 所得的結(jié)果在統(tǒng)計上是等價的（和其他任何方法獲得的結(jié)果相等）。16. 對于面粉這類低密度的散裝樣本，可以照常檢測么？ 答：可以。 17. 對于醬油這樣的深色樣本，會影響定性檢測結(jié)果的判讀么？您有什么好的建議？ 答：如果搭配檢測儀進行定量分析，不存在這個問題；如果只是通過肉眼觀察變色進行定性分析，深色樣本如果擔(dān)心肉眼不能夠清晰的辨認，建議進行稀釋后再進行檢測。還記得第 15 題得答案么？加樣是 0.5g 或 1.5g 所得的結(jié)果在統(tǒng)計上是等價的和其他任何方法獲得的結(jié)果相等）。稀釋同樣的道理。 18. 如果是檢測水樣，還需要加入無菌水么？加多少？ 答：建議加水樣 1ml，無菌水 10ml。 19. 不同的微生物對應(yīng)的開始顏色和呈陽性的顏色都相同么？請舉例說明。 答：不同。 例如，沙門氏菌孵育 10 分鐘左右出現(xiàn)的開始顏色為紅色，陽性顏色為黃色；李斯特菌，開始顏色為藍色，陽性顏色為黃色。具體請參考對照表。20．微生物檢測儀兼?zhèn)浞跤龣C的功能么？ 答：是的。將檢測瓶充分搖勻后立即放入檢測儀，在軟件上進行檢測菌類設(shè)置后。檢測儀會自動進行孵育，并自動給出定量分析檢測。 21. 微生物檢測儀兼?zhèn)湔袷幤鞯墓δ苊矗?答：不具備。需用手用力搖 2‐3 分鐘，或振蕩器搖 20 秒左右，直至充分溶解或混合。 22. 微生物檢測儀的判讀原理是什么？ 答：微生物檢測儀是一款精密的光學(xué)判讀儀。通過光學(xué)原理精密探測檢測瓶中的顏色變化，并給出的定量分析檢測。 23. 微生物檢測儀是外接電源，還是自帶充電電池？ 答：兩者都有。電池是標(biāo)準(zhǔn)的筆記本電腦電池，更換、維修方便。 24. 微生物檢測儀可以同時、獨立地檢測多少個檢測瓶？ 答：8 個。同時、獨立的探測，并分別給出定量分析。 25. 微生物檢測儀定量分析，需要在電腦上安裝分析軟件么？ 答：需要按照配套分析軟件。 26. 怎樣的計算機操作系統(tǒng)對該分析軟件兼容？ 答：XP, Vista, Windows 7 27. 如果檢測儀是初次開機，接通電源后需要稍等多少時間再進行下一步操作？ 答：若初次開機，開機后停留 40 秒左右繼續(xù)操作為宜。 28. 檢測儀進行定量分析時，充分混合后的檢測瓶是應(yīng)該立即放入檢測儀，還是稍等片刻后再放入？ 答：充分混合后立即放入檢測儀。 29. 檢測瓶放入檢測儀后，在檢測儀分析軟件點擊開始，軟件界面上對應(yīng)檢測孔的燈會變成什么顏色？ 答：在所檢測檢測瓶對應(yīng)的操作界面上點擊“Start”（開始），對應(yīng)孔的指示燈由綠色變?yōu)榧t色。表明檢測開始并進行中。 30. 當(dāng)檢測結(jié)束后，分析軟件界面對應(yīng)孔的燈光會恢復(fù)為什么顏色，說明檢測結(jié)束，可以放入新樣本? 答：在檢測進行時，指示燈為紅色。當(dāng)檢測結(jié)束后，指示燈變?yōu)榫G色。此時在對應(yīng)的檢測儀檢測孔放入新的檢測瓶開始下一輪檢測是可以的。檢測時間由細菌的存在量決定（當(dāng)微生物含量較高時），或由對照表對應(yīng)的檢測時長決定（當(dāng)微生物含量很低時，應(yīng)超過對照表中檢測 1CFU 對應(yīng)的檢測時間）。 31. 微生物檢測瓶的分析時間和檢測瓶中微生物含量之間是什么關(guān)系？ 答：反比關(guān)系。即微生物含量越多，對應(yīng)的檢測時間越短；微生物含量越少，對應(yīng)的檢測時間越長。 如果樣本中微生物含量過高，幾分鐘甚至幾秒鐘內(nèi)檢測儀的定量分析結(jié)果就會顯著變動；如果微生物含量很低，（由于 RVLM 是非常精密靈敏的儀器）有經(jīng)驗的使用中可以通過幾小時甚至幾分鐘的數(shù)據(jù)變化初步判斷微生物目標(biāo)含量是否達到規(guī)定要求。 32. 分析檢測前是否應(yīng)該有明確的實驗?zāi)康囊源_定你要檢測的微生物含量（根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定微生物的存在量。）？ 答：這樣是的。 例如，根據(jù)國家 GB 標(biāo)準(zhǔn)，或根據(jù)國際 EC 標(biāo)準(zhǔn)等，都有明確（或部分明確）地注明微生物在不同家禽、畜牧物種中的允許存在量。具體地說，在進行微生物檢測時，我們首先要明確檢測目的。如、國際 EC 2073:2005標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，大腸桿菌在鮮肉中允許的存在量為 CFU 10^2/g，即每克鮮肉中大腸桿菌的含量不允許超過 CFU 10^2。此時我們根據(jù)對招表，找到大腸桿菌所在列，查 log CFU 10^2=2，即在大腸桿菌行中找到數(shù)字 2 所對應(yīng)列的數(shù)字為 14。無論是肉眼進行定性分析，還是檢測儀進行定量分析，要檢測樣本中大腸桿菌含量是否超過 CFU 10^2，長在 14 小時即可得到嚴格精準(zhǔn)的分析結(jié)果。 如果是檢測瓶進行定量分析，有經(jīng)驗的實驗員會在很短時間內(nèi)（譬如十幾分鐘）根據(jù)定量分析數(shù)據(jù)的動態(tài)變化情況，初步判斷出檢測瓶中的微生物含量。 33. 明確要檢測微生物含量的目的是什么，對照表起到什么作用？ 答：是確定所檢測微生物對應(yīng)的孵育溫度、開始顏色、分析時間、陽性顏色的標(biāo)準(zhǔn)對照的依據(jù)。具體的使用方法請參考上一題答案。 34. 什么是 CFU? 答：colony‐forming unit,菌落形成單位。 經(jīng)培養(yǎng)所得菌簇形成單位的英文縮寫。 細菌（可見）和真菌的測量單位。CFU:colony‐forming unit,菌落形成單位，將稀釋后的一定量的菌液通過澆注或涂布的方法，讓其內(nèi)的微生物單細胞一一分散在瓊脂平板上，待培養(yǎng)后，每一活細胞就形成一個菌落。與常規(guī)利用顯微鏡對微生物數(shù)量進行測量不同，主要是對可見（即多數(shù)情況下形成菌落）的細菌數(shù)量進行測量的單位。 意思就是每毫升菌液中含有多少單細胞！ 傳統(tǒng)上就叫“個”。但是，我們知道，一個菌落并不一定是一個細菌所生成，也可能是由一簇細菌（一個細菌團）所生成，這時候再叫“個”就不太準(zhǔn)確啦，準(zhǔn)確的叫法就是“菌落形成單位”，英文縮寫“CFU”。就像“公斤”和“千克”，只是叫法不同，數(shù)量上沒有變化。 CFU 代表“colony forming units”。CFU/mL 指的是每毫升樣品中含有的細菌群落總數(shù)，也有用 CFU/g 即對應(yīng)固體培養(yǎng)基。 35. 假如我要檢測樣本中大腸菌群的菌落含量不得超過 106CFU/g 或 106CFU/ml， 用肉眼觀察瓶中顏色變化進行定性分析，請對照“孵育溫度和比色對照表”詳細敘述檢測步驟。 答：步：放入樣本 放入所要檢測的樣本（0.1‐1.0g，或 0.1‐1.0ml），加入 11ml 無菌水（根據(jù)檢測物情況，若為液體，建議加樣 1ml，加無菌水 10ml。差別不大），蓋緊瓶蓋。 第二步：搖動瓶子直到溶劑充分溶解或混合。 如果用手需有力搖 2‐3 分鐘左右；或用振蕩器搖，需時 20 秒左右。 第三步：在適當(dāng)時間判讀檢測結(jié)果 (1)若肉眼定性分析。根據(jù)對照表確定大腸菌群對應(yīng)的孵育溫度、開始顏色、檢測時間、陽性顏色等信息。 孵育溫度：根據(jù)對照表為 37℃； 開始顏色：即搖勻后放入 37℃恒溫箱孵育 10 分鐘左右會呈現(xiàn)的顏色。根據(jù)對照表為紅色； 檢測時間：我們要檢測標(biāo)準(zhǔn)為大腸菌群含量不超過 106CFU/g 或 106CFU/ml。根據(jù)對照表，對應(yīng)列log 106=6，找數(shù)字 6 對應(yīng)行的數(shù)字為 6，即檢測時間為 6 小時。即，觀察時間確定為 6 小時。 陽性顏色：根據(jù)對照表，大腸菌群的陽性顏色為黃色。 確定了以下信息后，我們把充分混合后的檢測瓶放入 37℃恒溫箱，這樣一直放置。孵育 10 分鐘左右，我們觀察會發(fā)現(xiàn)檢測瓶會呈現(xiàn)檢測大腸菌群對應(yīng)的開始顏色——紅色。繼續(xù)放置，到 6 個小時的時候進行觀察，如果顏色變?yōu)辄S色，說明樣本中大腸菌群含量超過 106CFU/g 或 106CFU/ml，樣本為不合格品；若沒有變?yōu)辄S色，而是始終保持開始顏色紅色，或其他中間顏色，說明樣本中大腸菌群含量未超過 106CFU/g 或 106CFU/ml，樣本為合格品。 (2)若檢測儀進行定量分析 此步驟請參見下一題。 第四步：無菌處理 后別忘記按下檢測瓶的瓶蓋上方對檢測瓶進行滅菌處理。按下瓶蓋后搖一搖，好了，可以安全丟棄了。 注意：在進行實驗操作時，不要碰到檢測瓶的瓶蓋頂部，以免在不當(dāng)?shù)臅r候進行了無菌處理，影響試驗結(jié)果。 36. 若第 34 題搭配檢測儀進行的定量分析，請詳述操作步驟。 答：(2)若檢測儀進行定量分析 將充分混合后的檢測瓶立即放入檢測儀。 啟動檢測儀軟件，點擊“Station”（狀態(tài)）錄入相關(guān)信息（包括：檢驗員姓名、檢測、檢測樣本所屬客戶、檢測時間等信息）；在軟件操作界面“analysis type”（檢測種類）下拉菜單中勾選所檢測的微生物種類，點擊 ok，點擊開始，指示燈變紅， 開始進入分析狀態(tài)。觀察檢測儀的定量分析數(shù)據(jù)變化，進行判斷。 37. 為什么在檢測結(jié)束之前，不能按下檢測瓶的瓶蓋？ 答：無菌處理。瓶蓋中還有無菌處理物質(zhì)，按下瓶蓋，瓶蓋中的無菌處理物進入瓶內(nèi)，與瓶內(nèi)溶劑進行反應(yīng)，完成無菌處理。因此，實驗過程中請不要輕易觸碰檢測瓶的瓶蓋。 技術(shù)人員選答題，銷售人員必答題：1. 檢測瓶可以檢測多少種微生物，分別是什么？ 答：活菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、腸道桿菌科、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、李斯特菌、腸球菌、亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、曲霉屬真菌、曲霉菌、酵母菌。 以后還有陸續(xù)有其他微生物菌種的檢測瓶相繼面世。包括軍團菌等。 2. 檢測瓶在檢測大腸桿菌時，可以檢測到所有的大腸桿菌菌株么（包括目前流行的 EHEC?） 答：是的，可以檢測到全部的大腸桿菌菌株，包括 EHEC 腸出血性大腸桿菌（E.coli O104, O111, O157 等） 3. 檢測瓶的應(yīng)用范圍有哪些？ 答：衛(wèi)生控制：食品(HACCP)，廚房、工具、表面(HACCP)，水質(zhì)，(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫、藥品及化妝品。 與我們生活息息相關(guān)的：環(huán)境監(jiān)測機構(gòu)，農(nóng)產(chǎn)品及相關(guān)加工公司，水源檢測和制水廠，水配送公司，藥廠、藥房、化妝品廠，分析實驗室和 HACCP 診斷，奶制品廠，咖啡館、餐廳，消費者保護團體、工商管理機構(gòu)，室內(nèi)空調(diào)調(diào)節(jié)公司，尤其能應(yīng)用于軍事、大型展會等的食品快速檢測。 4. 你認為大腸桿菌檢測瓶、李斯特菌檢測瓶、沙門氏菌檢測瓶除了是用于食品安全檢測外，適用于醫(yī)療么？ 答：大腸桿菌(EHEC)、李斯特菌、沙門氏菌，這三款檢測瓶可用于體外臨床檢測。 Royal 微生物檢測瓶系列的定位依然是食品安全。在歐洲，對人體進行微生物的臨床體外檢測是非常少的，歐洲的各方面安全控制的很好。然而，在發(fā)展中國家，以上三款微生物的人體體外臨床檢測經(jīng)常發(fā)生。而以上三款檢測瓶用于體外臨床檢測的安全性和準(zhǔn)確度都可以保證。 4 合 1 試紙片和檢測瓶市場定位的區(qū)別 1）4 合 1 試紙片和檢測瓶比較 4 合 1 試紙片配合其分析儀，一臺分析儀可以同時檢測 48 個試紙片。因此，從經(jīng)濟成本的角度考量，一開機就是 48 片同時檢查。對于醫(yī)院，攢夠 48個糞便樣本后，性進行分析。 檢測瓶，一個樣本就可以進行檢查。而且更大的優(yōu)勢在于，這款產(chǎn)品會非常受醫(yī)生的歡迎。因為醫(yī)生可以不用接觸樣本，這是目前大多數(shù)的醫(yī)院檢測無法做到的。把瓶子給病人，讓病人自己將糞便樣本放入后送回給醫(yī)生。醫(yī)生拿到檢測瓶，在醫(yī)院的振蕩器上搖勻后，放入孵育機，等待結(jié)果判讀即可。 2）檢測瓶與醫(yī)院目前傳統(tǒng)檢測法的比較 目前醫(yī)院的檢測方式依然是培養(yǎng)皿法居多。這種方法令醫(yī)生反感的地方是醫(yī)生要接觸樣本。如果醫(yī)生處于懷孕期，接觸到李斯特菌的后果就是流產(chǎn)。如果檢測臺沒有處理干凈，也容易導(dǎo)致微生物的傳播。 檢測瓶，醫(yī)生完全不用接觸樣本。樣本放入檢測瓶的的這個過程交給病人在衛(wèi)生間去操作就可以。醫(yī)生要做的就是簡單的搖勻和放入孵育器孵育（振蕩器和孵育器都是醫(yī)院的常規(guī)設(shè)備）。 5. 無論固態(tài)、液態(tài)還是表面樣本，在檢測時是否都無需進行前處理？ 答：是的 6. 檢測儀的特異性是多少？ 答：99.999%（理論極限值） 7. 檢測儀的靈敏度是多少？ 答：可以檢測到 1 個活菌的理論極限值。 8. 做定性分析時，檢測需要幾步，分別是什么？ 答：三步：加樣；搖動瓶子直到充分溶解和混合；在適當(dāng)時間判讀結(jié)果（根據(jù)對照表）。后不要忘記按下瓶蓋上方進行無菌處理。 9. 做定量分析時，檢測需要幾步，分別是什么？ 答：同上。具體請參考檢測儀操作文檔。 10. 檢測后按下檢測瓶瓶蓋的目的是什么？ 答：無菌處理，請參考上第 45 題。 11. 檢測瓶的儲存溫度是多少？ 答：在 20℃-25℃左右既可以儲存，這個溫度下很方便運輸，對于臨檢來說是有利的。但隨著大氣溫室效應(yīng)，夏天時還是要注意儲存溫度不要超過 25℃，負責(zé)會影響檢測瓶檢測的靈敏度。然而，如果可以放到 4℃進行儲存，保質(zhì)期可以延長近一倍。 12. 如果預(yù)延長檢測瓶的有效期，儲存溫度為多少？ 答：4℃，具體見下表。
