牛口蹄疫O型IgG檢測試劑盒

一、產(chǎn)品名稱

通用名：牛口蹄疫O型IgG測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Bovine Antibody to Foot And Mouth DiseaseVirus (ELISA)

二、包裝規(guī)格  96T×1/盒、96T×2/盒

三、預(yù)期用途  口蹄疫是由口蹄疫（FMDV）感染引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、接觸性。本試劑盒用于檢測牛血清、血漿中口蹄疫O型體，可用于牛口蹄疫O型疫苗免疫效果評價。

四、試劑盒原理

    牛口蹄疫O型IgG檢測試劑盒系由預(yù)包被口蹄疫O型原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測牛血清、血漿樣本中口蹄疫O型體。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有口蹄疫O型體，則將與酶標(biāo)板上原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上原體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加T底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫O型體。

五、試劑盒組成

酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及期

 于2～8℃避光保存，期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

七、適用儀器  含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

牛口蹄疫O型IgG檢測試劑盒操作步驟

一、樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如5μl血清加入495μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二、檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物50μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

結(jié)果分析

一、參考值

 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.15，陽性對照≥0.3。

二、牛口蹄疫O型IgG檢測試劑盒檢驗結(jié)果的解釋  

1.S/N=樣品A值/陰性對照平均A值（陰性對照平均A值小于0.08按0.08計算）。

2.當(dāng)S/N＞2.1時為牛口蹄疫O型體陽性，S/N≤2.1時為牛口蹄疫O型體陰性。

3.本實驗結(jié)果為陰性表明體水平不足，建議補打相應(yīng)疫苗。