馬源性成分核酸試劑盒（熒光PCR法）

產(chǎn)品貨號：PA75A\01

版  本  號：Version 1.0

包裝規(guī)格：50 T/盒

產(chǎn)品說明：

馬源性成分核酸試劑盒（熒光PCR法）,采用Taqman探針技術(shù)，以馬源性成分的保守基因?yàn)榘悬c(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物和探針，用于樣品中馬源性成分核酸的輔助檢測。本產(chǎn)品引入了dUTP/UDG系統(tǒng)，可降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR產(chǎn)物導(dǎo)致的交叉污染。

馬源性成分核酸試劑盒產(chǎn)品組分：

注：不同批號產(chǎn)品的成分之間不可以混用或互換！??！

儲存條件與有效期：

-20℃避光儲存，有效期12個(gè)月。干冰運(yùn)輸。重復(fù)凍融小于5次。

適用儀器：

ABI 7500、宏石96P、Bio-Rad CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等。

樣品要求：

1.          適用樣品類型

動物組織制品、食品、飼料或血液樣本；

馬源性成分核酸試劑盒要求送檢新鮮樣品，禁止反復(fù)凍融！

2.          樣品處理（核酸提取區(qū)）

參照《NY/T 541-2016 獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范》等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品前處理， 使用商業(yè)化試劑盒提取樣品中的核酸。提取后的核酸應(yīng)立即檢測，否則凍存于-20℃，保存時(shí)間不超過6個(gè)月，禁止反復(fù)凍融！

馬源性成分核酸檢測試劑盒檢測方法：

為了防止污染，實(shí)驗(yàn)需分區(qū)操作?。?！

注：核酸提取參照樣品要求，在核酸提取區(qū)或樣品處理區(qū)進(jìn)行。

1.          試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

取出試劑盒中各組分以及自備試劑，放置室溫，待溫度平衡至室溫，混勻后備用。隨后按照每個(gè)反應(yīng)為

（1）12.5μL酶反應(yīng)液+7.5μL引探預(yù)混液來配制熒光混合液。當(dāng)待檢樣品數(shù)為n時(shí)，所需反應(yīng)數(shù)N=樣品數(shù)(n)+陽性對照(1)+陰性對照(1)。

（2）根據(jù)檢測樣品數(shù)量，建議每次檢測均設(shè)置陰性對照和陽性對照。將所需數(shù)量（N）的熒光混合液分配到每個(gè)PCR管（或八連管）中，20 μL/管。

當(dāng)準(zhǔn)備使用時(shí)，再轉(zhuǎn)移到樣品處理區(qū)。

1.          樣品加樣（在樣品處理區(qū)進(jìn)行）

在每個(gè)PCR管中分別加入5 μL經(jīng)提取的待測樣品核酸、陰性對照和陽性對照，蓋上管蓋， 瞬時(shí)離心，使液體全部沉于管底。

2.          qPCR擴(kuò)增（在擴(kuò)增與分析區(qū)進(jìn)行）

（1）熒光通道選擇

熒光基團(tuán)選擇FAM通道檢測馬源性成分；淬滅基團(tuán)設(shè)置為none。如ABI qPCR儀，還需設(shè)置Passive Reference為ROX。其他儀器請參考儀器說明書。

（2）qPCR擴(kuò)增程序設(shè)置

設(shè)置反應(yīng)體系為25 μL.

3.          結(jié)果分析（以ABI 7500 qPCR儀為例）

反應(yīng)結(jié)束后，qPCR儀將自動生成結(jié)果。若儀器自動生成的擴(kuò)增曲線或閾值線有異常，用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行進(jìn)行調(diào)整，基線Start值可以在 3~10，基線End值可設(shè)在5~20，調(diào)整各擴(kuò)增曲線的基線區(qū)相對水平即可。點(diǎn)擊Analyze進(jìn)行分析。

4.          質(zhì)量控制

試劑盒中各控制項(xiàng)應(yīng)符合下列要求，否則實(shí)驗(yàn)無效。